Monthly Archives: 九月 2012

GeneCopoeia提供其他物种的ORF克隆吗?

回答:我们目前提供已构建的人、小鼠ORF克隆。我们正要推出其他模式动物(如大鼠)的全长ORF克隆。如果您拥有感兴趣的模式动物基因的全长ORF序列,请提供给我们这些基因的基本信息(GenBank Accession或核酸序列),我们会优先将这些基因克隆到载体上。收取的费用和目录上的ORF克隆一样。我们还提供将人、小鼠基因克隆到特定载体的定制服务。
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我做了表达实验,但却没有目标蛋白的表达,为什么?

回答:一个带有启动子的正确的ORF DNA序列并不能保证相应的蛋白的表达。影响重组蛋白表达的因素很多:1)你选用的的表达载体是否与你的宿主相匹配,如pReceiver-M01是在哺乳动物细胞中表达的,而pReceiver-B01则是在细菌里表达的。2)如果表达的是一个膜蛋白,它是否需要在细胞内定位的靶序列。3)过量表达的蛋白对宿主是否存对表达宿主细胞有毒性作用?4) 该蛋白质是否正确折叠成有功能或者能适合免疫分析所需的三级结构?5)如果用一特异的单克隆抗体检测蛋白表达,最好做全长ORF的DNA测序以确定你是否得到一个不同的ORF剪接体。  
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你们对每一个基因都做过表达了吗?

回答:我们对所有全长ORFs进行了 用pReceiever-B01载体和一种表达宿主细胞(E. coli)在一种表达条件的表达实验。我们没有用其它表达宿主细胞和其它表达条件对所有全长ORFs进行蛋白表达的检测。  
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通过全序列测序,我发现这是我感兴趣的基因中的一个可变剪接体,你们能重新克隆或替换它吗?

回答:我们将尽最大的努力克隆原始的剪接形式,为你提供有偿替换的克隆。但是,我们无法保证得到特异的剪接体的克隆,也无法确定获得的克隆的具体日期。
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在序列上有一个核苷酸碱基的改变,而且它所编码的氨基酸正是位于许多文献上报道的蛋白的活性位点,你们将会如何处理?

回答:对于这类情况,尽管我们不提供无偿克隆替换,但是我们可以以最低价提供突变服务(可以改变任意地核苷酸组成)。
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因为是用PCR的方法扩增全长ORFs,你们将如何处理从你们那里购买的由于PCR产生的突变的ORF克隆?

回答:我们的系统结合了一些新的、高保真的PCR专利技术,这些方法可以使扩增全长ORFs的保真度提高10倍。它是通过在低的反应温度下减少引物与模板DNA 的非特异结合以及减少扩增所需的循环数来达到高保真的目的的。由于遗传多态性和基因的多选择性剪接方式,我们只保证在我们的全长ORF序列没有移码突变也不会引入终止密码子。如果发生上述情况,我们将更换有问题的克隆或者退还所收费用。
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如何解释你们实际序列与GenBank上序列的差异?

回答:有两种不同的可能或两者兼而有之的可能:1)自然因素,包括遗传多态性、选择性剪接方式、NCBI数据库注释的更新导致基因的多个版本、数据递交者的DNA测序的错误或着模糊不清;2)PCR过程导致的改变。购买ORF克隆的用户往往只是将我们的ORF测序与数据库的基因的某个参照版本的序列进行比较,而把任何的差异都认为是由于PCR产生的突变。通过对将近20,000我们克隆的人类基因的多个克隆的分析,比较了我们的序列与数据库的所有的转录本和相应基因座上的序列包括基因组序列、ESTs、其他cDNA/mRNA 转录本,我们发现大部分差异很明显来源于遗传多态性和选择性剪接方式而不是PCR产生的。 我们的ORF序列与相应的基因组的差异要比数据库发表的基......
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你们是如何生产全长的ORF的?

回答:我们结合多种专利技术以提高PCR的保真度,通过PCR把全长的ORF扩增出来(详见ORF白皮书)。我们采用70多种人组织cDNA 文库作为模板来生产全长ORF。  
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我想对ORFs进行测序,我需要用什么引物?

回答:对于ORFEXPRESS™ 穿梭克隆,正向测序引物(ORF 5'端上游)是:5'-CCCAGTCACGACGTTGTAAAACG,反向引物(ORF 3'端下游)是5'-ATGGTCATAGCTGTTTCCTG。对于OmicsLink™ clones,你可在我们的网页上查阅测序引物的序列。
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你们是如何对你们的克隆进行质量控制的?

回答:我们对每一个全长ORF克隆进行了测序。另外,在每个克隆投递給你之前,我们会再次用ORF特异性的核酸引物进行PCR验证,确保投递的克隆正确无误。
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我在你们公司的网页的数据库中找不到我所需要的基因,你们能为我克隆该基因吗?价格如何?

回答:是的,我们可以为你克隆你所需要的基因。我们的目标是克隆人类所有基因的全长ORF,我们正朝这方面努力。你所感兴趣的基因有可能已在我们的生产线上或即将进行克隆。如果你给我们提供GenBank 登记号、基因名称、核苷酸或氨基酸序列的信息,我们会将该基因安排到优先生产的列表上,尽快为你克隆。通常完成克隆需要两周的时间,尽管我们不能完全保证能在这时间内得到该基因。一旦克隆成功我们会尽快通知你。这项服务不需要附加费用。  
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