c-Jun与Fos和其他Jun相关蛋白一起形成同型二聚体或异型二聚体结构的转录因子复合物AP-1。TF-Detect™ AP-1/c-Jun Activity Assay Kit可以96孔板的形式快速、灵敏的检测人、小鼠和大鼠样品的Ser73-磷酸化c-Jun(氨基末端活性区Ser73被磷酸化的c-Jun)。包含AP-1/c-Jun保守结合位点的双链寡核苷酸被固定与96孔板上,核提取物中的c-Jun蛋白被固定化的寡核苷酸特意的捕获。Ser73-磷酸化c-Jun可被一种磷酸化c-Jun一抗和HRP标记的二抗检测到,由HRP底物TMB产生的比色信号很容易用分光光度法定量。用于检测Ser73-磷酸化c-Jun的抗体同样也可以识别Ser100-磷酸化JunD,因为保守的特异结合位点同样存在于c-Jun and JunD上。
产品优势
适用于多物种
- 可用于人、小鼠和大鼠
灵敏度高
- 最低可检测0.2 µg核裂解物中的Ser73被磷酸化的c-Jun
HTS兼容
- 可采取96孔板形式进行高通量分析,也可采取单排(8孔)形式进行分析
Fast
- 从准备到检测仅需3.5小时
c-Jun的背景
c-Jun与Fos和其他Jun相关蛋白一起形成同型二聚体或异型二聚体结构的转录因子复合物AP-1。AP-1结合于一种TAP反应元件(TRE),并调控基因表达以作为对生长因子、肿瘤促进剂、细胞因子等各种刺激的应答。AP-1控制着包括分化、增殖、凋亡和应激反应等细胞过程。
磷酸化作用对c-Jun进行严格的翻译后调控。c-Jun具有几个磷酸化位点,一个位于c-JUN DNA结构域附近的C端,该位点的磷酸化在静息状态一直了c-Jun的活性。另外两个磷酸化位点是Ser63和Ser73,它们位于c-Jun的反式激活结构域附近。SAPK/JNKs通过对Ser63和Ser73位点的磷酸化而激活c-Jun。
实验流程
图1.利用TF-Detect AP-1/c-Jun Activity Assay Kit试剂盒检测MCF-7 (左)和NIH3T3 (右)细胞核提取物中的c-Jun蛋白活性。检测前,用紫外线照射两种细胞20秒。按照说明书附录中方法准备细胞核提取物。
- Lee, J. et al (2013) Interleukin‐1β enhances cell migration through AP‐1 and NF‐κB pathway‐dependent FGF2 expression in human corneal endothelial cells. Biology of the Cell, online 7 Mar 2013 DOI: 10.1111/boc.201200077. [AP-1/c-Jun Activity Kit].