AmpArray™用于检测基因在不同样品中的表达差异(表达谱)。AmpArray™在一个96孔的PCR平板排列着48对(每对引物有2个孔)用于扩增特殊基因片断的引物(图1)。其中包含一对看家基因(G3PDH)的特异引物,作为正对照,其余的引物对应于各自的基因,这些基因按照不同的生物功能,如生物途径,疾病基因或基因家族来进行分类而置于同一AmpArray™ PCR平板。这些引物通过高可信度的引物设计算法来设计的,它们有统一的退火温度和相近DNA长度的PCR产物使得一套PCR的反应条件可以适用于每对引物。
RT-PCR是一种简单而可靠的可用于比较基因在不同样本中表达水平的方法,但是,很难用同一PCR条件在一块96孔板中完成多个基因的扩增。它需要每对引物都适合在一种PCR条件下进行扩增。出于这个目的,我们尽力优化引物对以至每对用在AmpArray™ PCR中的引物都可以扩增成功。图2中展示了一个使用AmpArray™的MAP激酶的例子。
AmpArray™的应用
- 特定基因家族的表达谱分析
- 检测低拷贝数的基因表达差异
- 可以检测和发现基因多剪切方式
- 验证来自于高密度基因芯片的数据
- 检测RNA干涉的基因表达情况
AmpArray™的优势
- 容易使用并且节约时间:无放射性标记,无需杂交,1到2天内就可以获得数据;
- 费用低廉:不需要贵重的仪器,只需要一台96孔的常规PCR仪;
- 高灵敏度:PCR循环数可以根据样品的转录水平进行调整;
- 高特异性:每对引物都是精选的,并且结果是可预见的;
- 可利用总RNA:只需两个逆转录反应,即可对上百个基因完成检测,优化的引物对可以避免DNA污染所带来的影响。
- 易发现特异基因的多种不同剪切方式 (图.2).
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