生物素连接酶 (Biotin Ligase)由birA基因编码所得,能活化生物素形成生物素酰 -5'-腺苷酸,将生物素特异地转移到生物素受体标签蛋白(如AviTag 融合蛋白)上,使标签蛋白生物素化,也可用作生物素操纵子阻碍物。又名为:生物素操纵子阻碍蛋白(biotin operon repressor protein)、birA、生物素酶合成酶(biotin holoenzyme synthetase)、生物素-乙酰辅酶a羧化酶合成酶(biotin-[acetyl-CoA carboxylase] synthetase)。
生物素连接酶的相关菌株
AVB 100菌株
AVB100是一种大肠杆菌E. coli K12菌株 [MC1061 araD139 delta(ara-leu)7696 delta(lac)l74 galU galK hsdR2(rK-mK+) mcrB1 rpsL(Strr)]。该菌株的染色体带有稳定转入的birA基因。
在该菌株中,BirA蛋白的过表达可由阿拉伯糖诱导所得。稳定转入的birA基因不需使用抗生素维持。在AVB100使用IPTG诱导的载体如Avidity's pAC、pAN、pATN 和pATC AviTag载体,可独立调控目的基因及BirA的表达水平。该菌株仅限个人研究使用,不可分销,使用前请阅读产品的相关许可证明。
AVB99菌株
AVB99是一种带有pACYC184质粒的大肠杆菌E.coli (XL1-Blue),该质粒包含IPTG诱导的birA基因,可过表达生物素连接酶(pBirAcm),是一个低拷贝数的质粒。培养含该质粒的菌株可使用10 µg/mL浓度的氯霉素。
AVB101菌株
AVB101是大肠杆菌E. coli 的B菌株(hsdR, lon11, su1A1),内含pACYC184质粒,该质粒含有IPTG诱导的birA基因,可过表达生物素连接酶(pBirAcm)。该菌株生长快速且健康,不含添加OmpT或Lon蛋白酶,是理想的蛋白表达工具菌株。
生物素连接酶及AviTag蛋白的表达均由IPTG (1 mM)诱导。诱导阶段必须添加生物素,添加至其终浓度为50 µM。pAN及pAC载体需添加氨苄青霉素维持,抗生素浓度建议为100 µg/mL。
Avidity's AVB99及AVB101的质粒特性:
|
![]() |
![]() |