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GeneCopoeia 提供 Cas9 核酸酶的稳定表达细胞系。这些细胞系能为您的 CRISPR 基因组编辑应用提供一个方便、高效的工具。 我们会提供预制的Genome-CRISP™ Cas9 人类或小鼠稳定表达细胞系，如H1299或HEK293T。Cas9 核酸酶的基因已被稳定整合到这些细胞系基因组上的 safe harbor 位点（图1）。此外，我们也能将 Cas9 核酸酶基因稳定整合到您所指定的细胞系基因组。 Cas9 核酸酶与 sgRNAs 这个组合被广泛用于在真核细胞乃至动物模型上生成靶向基因组修饰，包括基因敲除、突变修饰、内源基因融合标签以及更多其他应用。而基因组上的 safe harbor 位点整合了 Cas9 基因的单克隆人类细胞系能保证该基因表达的安全性、可靠性以及持续性。 |
优势
- Cas9 稳定整合将 sgRNA 共转染或共转导操作的需求降到最低，是高通量 sgRNA 应用的理想选择。
- Safe Harbor 位点整合能确保稳定的 Cas9 表达，同时对细胞无副作用。
- 单克隆细胞系能保证单一基因背景下持续的、高水平的 Cas9 表达。
- 可配合GeneCopoeia Genome-CRISP™ sgRNA 克隆、sgRNA文库以及供体克隆服务使用。
图 1. Cas9 核酸酶稳定表达结构的示意图。Cas9 核酸酶基因被装载到到 GeneCopoeia 的人类 AAVS1 safe harbor 敲入克隆载体。该载体的结构配合 GeneCopoeia 的safe harbor 基因敲入技术，能将 Cas9 核酸酶基因敲入到人类第19号染色体上的 AAVS1 位点。单克隆分离通过嘌呤霉素（Puro）药筛实现。
人类基因组 AAVS1 位点上的稳定整合确保了 Cas9 核酸酶基因持续稳定的表达。通过以下的 T7 核酸内切酶 I 错配酶切检测，我们可以看到 在 AAVS1 位点上 的Cas9 核酸酶基因表达量及活性水平都相当高。（图2）
图 2. 稳定表达细胞系活性验证。用靶向 HUWE I 基因的 sgRNA 质粒转染 AAVS1 位点稳定整合 Cas9 核酸酶基因的人类 H1299 细胞系。24 小时后，收集细胞用于取基因组 DNA。使用GeneCopoeia IndelCheck 检测体系扩增sgRNA靶向的序列区，对 PCR 产物进行解链和退火处理，对照组不作处理，实验组用 T7 核酸内切酶进行错配酶切。实验组酶切产物跑胶获得预期的酶切条带，即能证明 Cas9 在这些细胞系中有活性。
更多关于基因组编辑的问题，请见
Cas9 人类 AAVS1 & 小鼠 ROSA26 safe harbor 敲入克隆
点击转导我们的人类 AAVS1 & 小鼠 ROSA26 Safe Harbor 试剂盒及敲入克隆产品网页
装载Cas9 基因表达结构的safe harbor供体克隆。能与safe harbor基因敲入试剂盒配合使用，将 Cas9 基因敲入到人类 AAVS1 或小鼠 ROSA26 safe harbor 位点。
- 使用大量单独或混合的 sgRNA 进行高通量筛选是药物靶标研究的理想方法（图2）。
- 方便同时对数个候选药物靶标进行验证。
- Cas9 稳定表达细胞系作为模型细胞系，具有生长迅速、易于转染或转导等特点。您可以在使用自己的细胞系进行转染/转导前，利用这个细胞系对 sgRNA 的活性进行验证；当 sgRNA 在您的细胞系中显示很少甚至无活性时，也可以利用它进行排查和疑难分析。
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培养着 Cas9 稳定表达细胞系的96孔板 |
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转染或转导 sgRNA 文库 | |
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对转染或转导后的平板进行筛选（如基因敲除导致的细胞死亡） |
图 2. 使用 Genome-CRISP™ sgRNA 文库进行药物靶标研究的应用示例。 上：96孔板培养能稳定表达Cas9核酸酶的细胞系。中：使用 sgRNAs 文库（独立克隆文库或混合文库）对板上的 Genome-CRISP™ Cas9 稳定表达细胞系进行转染或转导。下：对转染后的96孔板进行针对细胞死亡的筛选（图为黑孔）。每个sgRNA都带有barcode序列，因此相关的单个或多个sgRNA能被识别出来，列作药物靶标的候选。
GeneCopoeia 也提供稳定细胞系构建服务。您可以指定所需的细胞系，由我们为您将 Cas9 核酸酶或 Cas9 D10A 切口酶基因敲入到人类 AAVS1 或小鼠 ROSA26 safe harbor 位点。
此外，我们可以在您指定的细胞系基因组里通过CRISPR或TALEN技术引入近乎任意修饰，如基因敲除、突变修饰或融合标签。我们的服务涵盖CRISPR或TALEN靶点选择、工具克隆构建及验证、供体克隆设计及构建、转染还有单克隆细胞系分离。稳定细胞系服务联系可通过以下邮箱inquiry@igenebio.com，或填写以下表格。
