EZShuttle™重组克隆体系

 -Efficient cloning system based on phage lambda recombination, the same principle as Gateway® technology.

产品介绍

GeneCopoeia 提供的 EZShuttle™ 重组克隆体系应用 E.coli 和 λ 噬菌体特异位点的重组酶促体系使 DNA 片段在载体间相互转换;其原理与 Gateway® 克隆技术相同。EZShuttle™ 重组克隆体系主要包含以下产品:

1. EZRecombinase™ Mixes:催化 attL x attR 和 attB x attP 重组反应。

2. pEZ™ 表达载体: 主要用于构建即用型表达克隆。

3. EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆:GeneCopeia 提供约 35,000 种人和小鼠的 EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭      克隆。

EZShuttle™ 重组克隆体系与 Gateway® 克隆技术完全兼容,如表1所示。

 

表1. GeneCopoeia's EZShuttle™ 重组克隆体系(左列)与 Gateway® 克隆技术完全兼容。

 

产品优势

•   由重组酶、表达载体和已验证 ORF 序列的穿梭克隆组成的一个完整的重组克隆体系;

•   EZRecombinase™ LR Mix 的活性比 Gateway® LR Clonase™ 的活性高;

•  提供带有不同筛选标记和标签的 pEZ™ 表达载体,这些载体可用于基因克隆、基因编辑、蛋白质纯化和基因功能     分析;

 

产品应用

•   构建即用型表达克隆:使穿梭克隆或其它 DNA 片段插入到表达载体。

•   蛋白质纯化:使目的基因在一个或多个系统中表达,然后用于蛋白质纯化、形成结晶、抗体的制备、DNA 结合化验等。

•   启动子交换:克隆目的基因到带有不同启动子的载体。

•   启动子分析:利用报告基因测试不同启动子的功能,例如:荧光素酶。

•   基因标签:表达不带标签或带有不同融合标签的目的基因,例如: 6XHis、Flag®、GFP 等;可用于免疫共沉淀或亚细胞      定位等。

 

EZShuttle™ 重组克隆体系原理

GeneCopoeia 提供的 EZShuttle™ 重组克隆体系应用 E.coli 和 λ 噬菌体特异位点的重组酶促体系使 DNA 片段在载体间相互转换;其原理与 Gateway® 克隆技术相同(图1)。

 

 

    图 1. E.coli 和 λ 噬菌体位点间的重组机制。

 

备注: Gateway® 是 Life Technologies 的注册商标。

EZRecombinase™

EZRecombinase™

GeneCopoeia 提供的 EZRecombinase™ LR Mix 和 EZRecombinase™ BP Mix 可以使 DNA 片段高效、快速的在相兼容的载体间转换。

EZRecombinase™ LR Mix 使 DNA 片段从 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone(含有 attL 位点)转移到 pEZ™ 表达载体或其它 Gateway® pDEST 载体(含有 attR 位点)。EZRecombinase™ BP mix 催化含有 attB 位点的 DNA 片段与含有 attP 位点的载体进行重组反应,生成新的 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone。

购买 货号 产品 描述 价格 说明书  
RCBM-1001-020 EZRecombinase™ LR Mix (20 rxn) Catalyzes attL x attR cloning 2000.00
RCBM-1001-100 EZRecombinase™ LR Mix (100 rxn)     8725.00
  Coming soon! EZRecombinase™ BP Mix (20 rxn) Catalyzes attB x attP cloning      
  EZRecombinase™ BP Mix (100 rxn)      

 

 

 

产品优点

•   高效率酶,EZRecombinase™ LR Mix 活性比 Gateway® LR Clonase 的活性高;

•   与现有的 Gateway® 克隆技术完全兼容;

 

EZShuttle™ LR重组技术

在 EZRecombinase™ LR Mix 作用下,EZShuttle™ LR 重组技术将 DNA 片段从含有 attL 位点的 EZShuttle™ 或Gateway® Entry clone转移到含有 attR 位点的 pEZ™ 表达载体或 Gatewayt® pDEST 载体。 EZRecombinase™ LR Mix 包含 Int(λ Integrase)、IHF(E.coli Integration Host Factor)和 Xis(Excisionase)。

EZRecombinase™ BP mix 包含 Int 和 IHF,催化含有 attB 位点的 DNA 片段与含有 attP 位点的载体进行体外重组反应,生成新的 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone。

将 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone 与 pEZ™ 表达载体混合,然后加入 EZRecombinase™ LR mix,室温(25℃)反应 1 小时后用于转化 E.coli 感受态细胞(图2)。

 

 

图2. 一步法从 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone 转移 DNA 片段到 pEZ™ 表达载体或 Gatewayt® pDEST 载体。

pEZ™ vectors

pEZ™ 表达载体

GeneCopoeia 提供的 pEZ™ 表达载体可以高效、快速的与 EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆、ORFeome 克隆或 Gateway® Entry clone 在 EZRecombinase™ LR Mix 作用下发生重组反应,其功能与 Gateway® 目的载体相同。pEZ™ 表达载体含有不同类型的启动子、筛选标记和标签;也包含 safe harbor 基因敲入克隆载体,用于 CRISPR- 或 TALEN 介导的人类 AAVS1 或小鼠 ROSA26 位点的基因敲入。

购买 货号 产品 描述 启动子 筛选标记 报告基因 标签 价格
EZ001 pEZ-Lv199 pEZ-Lv199 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CMV Puromycin 3960
EZ003 pEZ-Lv233 pEZ-Lv233 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) EF1a Puromycin eGFP 3960
EZ004 pEZ-Lv195 pEZ-Lv195 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) EF1a Puromycin 3960
EZ006 pEZ-Lv201 pEZ-Lv201 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CMV Puromycin eGFP 3960
EZ017 pEZ-Lv236 pEZ-Lv236 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CAG Puromycin 3960
EZ018 pEZ-Lv237 pEZ-Lv237 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CAG Puromycin C-Flag 3960
EZ019 pEZ-Lv238 pEZ-Lv238 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CAG Puromycin C-Flag 3960
EZ007 pEZ-M02 pEZ-M02 expression vector for L x R recombination cloning (Mammalian) CMV Neomycin 3000
EZ008 pEZ-M13 pEZ-M13 expression vector for L x R recombination cloning (Mammalian) CMV Neomycin C-Flag 3000
EZ009 pEZ-M67 pEZ-M67 expression vector for L x R recombination cloning (Mammalian) CMV Hygromycin 3000
EZ010 pEZ-M68 pEZ-M68 expression vector for L x R recombination cloning (Mammalian) CMV Puromycin 3000
EZ011 pEZ-M98 pEZ-M98 expression vector for L x R recombination cloning (Mammalian) CMV Neomycin C-monomeric eGFP 3000
EZ033 pEZ-M06

pEZ-M06 expression vector for L x R recombination cloning (Mammalian)

CMV

Neomycin

N-3XHA 3000
EZ034 pEZ-M09

pEZ-M09 expression vector for L x R recombination cloning (Mammalian)

CMV Neomycin

C-Myc

3000
EZ035 pEZ-M12

pEZ-M12 expression vector for L x R recombination cloning (Mammalian)

CMV Neomycin N-3XFlag 3000
EZ012 pEZ-SH01 pEZ-SH01 expression vector for L x R recombination cloning (AAVS1 knockin) CMV Puromycin copGFP 3400
EZ013 pEZ-SH02 pEZ-SH02 expression vector for L x R recombination cloning (ROSA26 knockin) CMV Puromycin copGFP 3400
EZ014 pEZ-B01 pEZ-B01 expression vector for L x Rrecombination cloning (E. coli) T7 N/A N-His 3960
EZ015 pEZ-B02 pEZ-B02 expression vector for L x Rrecombination cloning (E. coli) T7 N/A 3960
EZ020 pEZ-P001 pEZ-P001
expression vector for L x R recombination cloning (Plant)
35S+omega Kanamycin 3960
EZ021 pEZ-P002 pEZ-P002 expression vector for LxR recombination cloning (Plant) Kanamycin C-eGFP 3960
EZ022 pEZ-P003 pEZ-P003
expression vector for L x R recombination cloning (Plant)
35S Kanamycin eGFP C-eGFP 3960
EZ023 pEZ-P004 pEZ-P004 expression vector for LxR recombination cloning (Plant) Kanamycin C-Gus 3960
EZ024 pEZ-P005 pEZ-P005
expression vector for L x R recombination cloning (Plant)
35S Kanamycin C-eCFP 3960
EZ025 pEZ-P006 pEZ-P005
expression vector for L x R recombination cloning (Plant)
Hygromycin 3960
EZ026 pEZ-P007 pEZ-P007 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) 35S+omega Hygromycin 3960
EZ027 pEZ-P008 pEZ-P008 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) 35S Hygromycin C-eYFP 3960
EZ028 pEZ-P009 pEZ-P009 expression vector for L x R recombination cloning (Plant) 35S Hygromycin eCFP C-eYFP 3960
EZ029 pEZ-P010 pEZ-P010 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) 35S Hygromycin 3960
EZ030 pEZ-P011 pEZ-P011 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) 35S Hygromycin N-eGFP 3960
EZ031 pEZ-P012 pEZ-P012 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) Hygromycin 3960
EZ032 pEZ-P013 pEZ-P013 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) Hygromycin C-Gus 3960

 

 

EZShuttle™ clones

EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆

GeneCopeia 提供约 35,000 种人和小鼠的 EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆,其包含的 ORF 都经过全长测序验证。当 ORF 的 N- 端带有融合标签或不带标签时,需保留终止密码子;当 ORF 的 C- 端带有融合标签时,需去除终止密码子。EZRecombinase™ LR Mix 使 ORF 转换到 pEZ™ 表达载体或 Gatewayt® 目的载体中。EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆也带有多克隆位点,也可用于经典的的酶切-连接克隆过程(图3)。

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产品优点

•   所有的 ORF 经过全长测序;

•   终止密码子可选;

•   带有 attL 重组位点和多克隆位点;

•   可与 pEZ™ 表达载体和 Gateway® 目的载体发生重组反应;

 

图3. EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆带有重组位点(attL1 和 attL2)和多克隆位点(MC1 和 MC2),可用于重组和传统酶切-连接的克隆过程。

订购

EZRecombinase™ Mix

购买  货号 产品  描述 价格 说明书 
RCBM-1001-020 EZRecombinase™ LR Mix (20 rxn) Catalyzes attL x attR cloning 2000.00
RCBM-1001-100 EZRecombinase™ LR Mix (100 rxn)    8725.00
  Coming soon! EZRecombinase™ BP Mix (20 rxn) Catalyzes attB x attP cloning      
  EZRecombinase™ BP Mix (100 rxn)      

 

 

 

EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆

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pEZ™ 表达载体

购买 货号 产品 描述 启动子 筛选标记 报告基因 标签 价格
EZ001 pEZ-Lv199 pEZ-Lv199 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CMV Puromycin 3960
EZ003 pEZ-Lv233 pEZ-Lv233 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) EF1a Puromycin eGFP 3960
EZ004 pEZ-Lv195 pEZ-Lv195 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) EF1a Puromycin 3960
EZ006 pEZ-Lv201 pEZ-Lv201 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CMV Puromycin eGFP 3960
EZ007 pEZ-M02 pEZ-M02 expression vector for L x R recombination cloning CMV Neomycin 3000
EZ008 pEZ-M13 pEZ-M13 expression vector for L x R recombination cloning CMV Neomycin C-Flag 3000
EZ009 pEZ-M67 pEZ-M67 expression vector for L x R recombination cloning CMV Hygromycin 3000
EZ010 pEZ-M68 pEZ-M68 expression vector for L x R recombination cloning CMV Puromycin 3000
EZ011 pEZ-M98 pEZ-M98 expression vector for L x R recombination cloning CMV Neomycin C-monomeric eGFP 3000
EZ012 pEZ-SH01 pEZ-SH01 expression vector for L x R recombination cloning (AAVS1 knockin) CMV Puromycin copGFP 3400
EZ013 pEZ-SH02 pEZ-SH02 expression vector for L x R recombination cloning (ROSA26 knockin) CMV Puromycin copGFP 3400
EZ014 pEZ-B01 pEZ-B01 expression vector for L x Rrecombination cloning (E. coli) T7 N/A N-His 3960
EZ015 pEZ-B02 pEZ-B02 expression vector for L x Rrecombination cloning (E. coli) T7 N/A 3960
EZ016 pEZ-Lv235 pEZ-Lv235 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CAG Puromycin eGFP 3960
EZ016 pEZ-Lv235 pEZ-Lv235 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CAG Puromycin eGFP 3960
EZ017 pEZ-Lv236 pEZ-Lv236 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CAG Puromycin 3960
EZ018 pEZ-Lv237 pEZ-Lv237 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CAG Puromycin C-Flag 3960
EZ019 pEZ-Lv238 pEZ-Lv238 expression vector for L x R recombination cloning (lentiviral) CAG Puromycin C-Flag 3960
EZ020 pEZ-P001 pEZ-P001
expression vector for L x R recombination cloning (Plant)
35S+omega Kanamycin 3960
EZ021 pEZ-P002 pEZ-P002 expression vector for LxR recombination cloning (Plant) Kanamycin C-eGFP 3960
EZ022 pEZ-P003 pEZ-P003
expression vector for L x R recombination cloning (Plant)
35S Kanamycin eGFP C-eGFP 3960
EZ023 pEZ-P004 pEZ-P004 expression vector for LxR recombination cloning (Plant) Kanamycin C-eGFP 3960
EZ024 pEZ-P005 pEZ-P005
expression vector for L x R recombination cloning (Plant)
35S Kanamycin eGFP C-eGFP 3960
EZ025 pEZ-P006 pEZ-P005
expression vector for L x R recombination cloning (Plant)
Hygromycin 3960
EZ026 pEZ-P007 pEZ-P007 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) 35S+omega Hygromycin 3960
EZ027 pEZ-P008 pEZ-P008 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) 35S Hygromycin C-eYFP 3960
EZ028 pEZ-P009 pEZ-P009 expression vector for L x R recombination cloning (Plant) 35S Hygromycin eCFP C-eYFP 3960
EZ029 pEZ-P010 pEZ-P010 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) 35S Hygromycin 3960
EZ030 pEZ-P011 pEZ-P011 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) 35S Hygromycin N-eGFP 3960
EZ031 pEZ-P012 pEZ-P031 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) Hygromycin 3960
EZ032 pEZ-P013 pEZ-P032 expression vector for L x R recombination cloning(Plant) Hygromycin C-Gus 3960

 

 

 

Competent E. coli

购买 货号 产品 描述 价格(¥)
U0104A 2T1 感受态细胞 (10×100 µl) 高效感受态细胞 200
U0201A 一步法高效感受态细胞制备试剂盒 (2ml) 高效感受态细胞制备试剂盒 88
CC001 DH5α 感受态细胞 (10×100 µl) 高效感受态细胞 200
U0201B 一步法高效感受态细胞制备试剂盒 (20ml) 高效感受态细胞制备试剂盒 398
CC003 Stbl3 感受态细胞 (10×100 µl) 高效感受态细胞 1000

 

 

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