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OmicsLink™表达载体系统整合了内部核糖体插入位点（IRES）元件，双顺反子(IRES) ORF表达载体使两个基因在一个载体中的同一个启动子下协同高效的表达两条ORF。我们已构建了超过2万个编码人类全长蛋白的ORF(不含5‘和3’非编码区) 的OmicsLink™双顺反子 (IRES)表达克隆。
OmicsLink™ 双顺反子 (IRES) ORF表达克隆
| ORF1: |
从2万多个编码人类全长蛋白的ORF序列中挑选 |
ORF2: |
eGFP
eCFP
eYFP
Luciferase
Biotin Ligase |
UBC9
HA-Sumo
His-AviTag-ubiquitin
Neomycin
Human ORFs |
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主要优势:
- 可在同一个载体中协同共表达两个目的基因: 无需担心共转染的效率及其他共转染过程中可能产生的问题。
- 当报告基因与目的基因协同共表达，其对目的蛋白生物活性的影响最低。
应用：
- 与报告基因如荧光蛋白或虫萤光素酶协同共表达
- 与蛋白修饰物基因如SUMO协同共表达
- 与生物素连接酶基因协同共表达
- =>能在体内生物素化带有 AviTag的目的蛋白。基于生物素-链霉亲和素的相互作用，已被生物素化的目的蛋白能被多种方法研究和检测
- 与筛选标记基因协同共表达
示例: 293细胞中带AviTag的eGFP被大肠杆菌生物素连接酶特异生物素化
参考文献：
- Moroz MA, Serganova I, Zanzonico P, Ageyeva L, Beresten T, Dyomina E, Burnazi E, Finn RD, Doubrovin M, Blasberg RG. Imaging hNET Reporter Gene Expression with 124I-MIBG. J Nucl Med. 2007 May;48(5):827-836.
- Allera-Moreau C, Chomarat P, Audinot V, Coge F, Gillard M, Martineau Y, Boutin JA, Prats AC. The use of IRES-based bicistronic vectors allows the stable expression of recombinant G-protein coupled receptors such as NPY5 and histamine 4.Biochimie. 2006 Jun;88(6):737-46.
- Mulky A, Sarafianos SG, Arnold E, Wu X, Kappes JC. Subunit-specific analysis of the human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase in vivo. J Virol. 2004 Jul;78(13):7089-96.
- Harries M, Phillipps N, Anderson R, Prentice G, Collins M. Comparison of bicistronic retroviral vectors containing internal ribosome entry sites (IRES) using expression of human interleukin-12 (IL-12) as a readout.J Gene Med. 2000 Jul-Aug;2(4):243-9.
- Fujiwara T, Urata Y, Tanaka N. lomerase-specific oncolytic virotherapy for human cancer with the hTERT promoter. Curr Cancer Drug Targets. 2007 Mar;7(2):191-201.
- Martinez-Salas E. Internal ribosome entry site biology and its use in expression vectors. Curr Opin Biotechnol. 1999 Oct;10(5):458-64.
- D Trouet, B Nilius, T Voets, G Droogmans, J Eggermont. Use of a bicistronic GFP-expression vector to characterise ion channels after transfection in mammalian cells. Pflugers Arch (1997) 434: 632-8.
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