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MethylAffinity™ Methylated DNA Enrichment Kit — 甲基化DNA富集试剂盒

MethylAffinity™ Methylated DNA enrichment kit提供了一种以GCM™磁珠法从全基因组中快速富集甲基化DNA片段的方法。浓缩后的甲基化DNA片段可提高下游实验与分析的效果,例如RT-PCR、微阵列、测序等甲基化状态和定位研究的方法。

以基因工程方法获得的GCM重组蛋白是一种具有甲基结合功能域(MBD)的蛋白,可与含有甲基化CpG双核苷酸的双链DNA特异的结合,比野生型MBD具有更高的亲和性和特异性。

实验流程

产品优势

更少的步骤和更少的时间

  • 整个实验过程不足2个小时
  • 固定化的GCM™重组MBD蛋白,无需再进行填料-MBD的固定化反应
  • 可结合双链CpG甲基化DNA,样品基因组DNA无需变性
  • 可快速洗脱产物,无需蛋白酶处理
  • 洗脱产物可立即用于RT-PCR等下游检测

高亲和力

  • 亲和力高于其他商业化MBD蛋白
  • 可富集分离仅有几个拷贝的甲基化CpG双核苷酸
  • 可处理纳克级的基因组DNA

梯度洗脱

  • 为精确研究甲基化状态,可结合NaCl梯度洗脱,GCM™-Bead能分离具有不同CpG位点密度的DNA片段

操作简便

  • 具有鲜艳的红色,比传统的sepharose Bead更有效地避免清洗过程中的损失
  • 试剂盒提供的限制性内切酶可用于基因组DNA的片段化
 
图1. 100ng小鼠基因组DNA与5µlGCM™-Bead室温结合 1小时,经binding buffer 清洗4次,最后用Elution buffer 洗脱甲基化DNA。收集结合后上清物(Wash)及洗脱物(Elution), 用小鼠β-acting Promoter primer(甲基化阴性对照)、小鼠 GAPDH Promoter primer(甲基化阴性对照)及小鼠IAP primer (甲基化阳性对照)进行PCR检测。β-acting Promoter primer 及GAPDH Promoter primer扩增带只出现在结合后上清物中, 而IAP primer的扩增带则出现在洗脱物中。   图2. 左边为sepharose,右边为GCM™-Bead。与传统的sepharose Bead相比较,GCM™-Bead更容易辨认,在清洗过程中有效避免损失。

 

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MAK-GCM-30 利用GCM™磁珠法从全基因组中快速富集甲基化DNA片段 (30次) GCM-beads based method for quick enrichment of double-stranded DNA fragments containing methylated CpG dinucleotides from whole genome. 3980

 

 

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DNA甲基化背景

DNA甲基化在哺乳动物参与许多细胞过程和负责招聘的基因沉默的转录镇压复合物。它在发育中起着至关重要的作用。然而在癌症中,启动子区域的大量甲基化经常被观察到,因此而导致肿瘤抑制基因和DNA修复基因的转录抑制。