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MethylAffinity™ Methylated DNA Enrichment Kit

DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一,在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育等过程中起着极其重要的作用。在正常的哺乳动物基因组中,CpG岛中的CpG位点通常处于非甲基化状态,而在CpG岛外的CpG位点则通常是甲基化的。大量研究表明,DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因表达。

本试剂盒利用经改造的GCM™重组MBD(methyl binding domain)蛋白对CpG甲基化位点的高亲和性从基因组中快速纯化CpG甲基化DNA片段,每次反应可以处理1~1000ng 基因组DNA。纯化后的CpG甲基化DNA片段结合RT-PCR及重亚硫酸盐处理法,可用于基因组甲基化水平分析及甲基化位点分析。同时,结合NaCl梯度洗脱,可以分离具有不同CpG甲基化密度的DNA片段。

产品名称 产品描述 产品货号 价 格 说明书
MethylAffinity™ Methylated DNA Enrichment Kit 采用MBD层析法,用于从整个基因组中快速纯化富含甲基化CpG的双链DNA片段 MAK-GCM-30 ¥3,980

工作原理:

产品特征及优点:

  • 步骤简单,反应时间短:固定化的GCM™重组MBD蛋白,无需再进行填料-MBD的固定化反应;可结合双链CpG甲基化DNA,样品基因组DNA无需变性;Elution buffer可快速洗脱产物,无需蛋白酶处理,洗脱产物可立即用于RT-PCR等下游检测,反应耗时少于2小时
  • 灵敏度高,亲和力强:可处理纳克级的基因组DNA;采用重组MBD蛋白,具有更高的CpG甲基化位点亲和力
  • 可分离具有不同甲基化程度的DNA:结合NaCl梯度洗脱,GCM™-Bead能分离具有两个以上不同CpG位点密度的DNA片段
  • 更易操作:GCM™-Bead具有鲜艳的红色,比传统的sepharose Bead更有效地避免清洗过程中的损失

图1. 50~0.5ng 小鼠基因组DNA 经MethylAffinity™ Methylated DNA Enrichment Kit纯化后,以洗脱产物为模板,对CpG阳性及阴性基因进行PCR扩增(35个循环)。GAPDH Promoter primer(negative control)PCR结果为阴性, IAP Promoter primer(positive control)PCR在小鼠基因组DNA 加入量低至1ng仍可得到阳性结果

图2. 100ng小鼠基因组DNA与5µlGCM™-Bead室温结合 1小时,经binding buffer 清洗4次,最后用Elution buffer 洗脱甲基化DNA。收集结合后上清物(Wash)及洗脱物(Elution), 用小鼠β-acting Promoter primer(甲基化阴性对照)、小鼠 GAPDH Promoter primer(甲基化阴性对照)及小鼠IAP primer (甲基化阳性对照)进行PCR检测。β-acting Promoter primer 及GAPDH Promoter primer扩增带只出现在结合后上清物中, 而IAP primer的扩增带则出现在洗脱物中。 图3. 左边为sepharose,右边为GCM™-Bead。与传统sepharose Bead相比,GCM™-Bead更加容易辨认,在清洗过程中有效避免损失。
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