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miArrest™miRNA抑制剂

高效抑制miRNA的功能

 

miArrest™ miRNA抑制剂可特异、高效地抑制生物体内源性miRNA的活性,是研究miRNA功能的必要工具。复能基因提供针对miRBase数据库中全部人、小鼠和大鼠miRNAs 的特异性抑制剂。

    1700条人类   ·   834条小鼠源   ·   408条大鼠源

基于载体的miRNA抑制剂表达克隆

复能基因提供基于慢病毒或非病毒载体的miRNA抑制剂表达克隆 ,采用H1或者U6启动子驱动miRNA抑制剂的转录,以保证能在大多数哺乳动物细胞中高水平表达。载体表达的miRNA 抑制剂特异、稳定地结合细胞内成熟的靶miRNA,阻止miRNA介导的靶标mRNA的降解或者翻译抑制。miRNA抑制剂克隆可转(感染)染细胞进行瞬时抑制或者稳定抑制。

基于HIV的慢病毒miRNA抑制剂表达载体 非病毒的miRNA抑制剂表达载体
miRNA inhibitors – lentiviral and non-viral 

backbone miRNA inhibitors – lentiviral and non-viral 

backbone


miRNA 抑制剂克隆的特点:

多样    即有慢病毒表达载体又有非病毒表达载体

方便    易于导入非分裂的和难转染的细胞;载体带有荧光蛋白报告基因便于转(感)染后的细胞筛选。

高效    与LNA修饰的或者其他类型化学合成的miRNA抑制剂相比具有更强、更长久的抑制效力和极低的细胞毒性。(参看表格1中的标记)

优质    miRNA抑制剂表达框按专有的算法设计并经过严格的实验测试

  基于载体的抑制剂 2'-甲氧修饰的抑制剂 LNA Inhibitors
抑制效力 +++++ ++ ++
特异性 +++++ +++ +++
稳定性 +++++ + +++
持久性 长期 瞬时 瞬时
细胞毒性 - - +
导入细胞难易程度 +++++ - -

表 1. 基于载体表达的和化学合成的miRNA抑制剂的比较

作用机制

miRNA 抑制剂克隆导入细胞后表达的miRNA抑制剂(miArrest)特异地结合它们的靶miRNA。miRNA抑制剂转录后折叠形成一个稳定的陷阱结构,暴露出两个可以捕捉、结合靶 miRNA的环。一分子的miArrest可结合两分子靶miRNA。miArrest高效、特异地结合细胞内成熟的靶miRNA,形成稳定的复合物,阻止了miRNA对靶标mRNA的降解或者翻译抑制,上 调miRNA靶标基因的表达(图1)。独特的载体设计确保最大程度抑制强度、抑制剂持久性和特异性,同时将脱靶效应降至最低。

mirna inhibitiors mechanism 

of action

图1. 基于载体的miRNA抑制剂的作用机理

图 2. miArrest miRNA抑制剂克隆以剂量-依赖的方式抑制靶miRNA
HEK293细胞中共转染miR-125a 抑制剂表达质粒 (GeneCopoeia HmiR-AN0094-AM01) 、miR-125a 前体表达质粒(GeneCopoeia HmiR0309-MR03) 和miR-125a的靶标LIN28 3’-UTR报 告质粒(GeneCopoeia HmiT019205-MT02:LIN28 的3’-UTR克隆到Gaussia 荧光素酶-碱性磷酸酶双报告载体)。转染24小时后检测报告基因Gaussia 荧光素酶和参照基因碱性磷酸 酶的活性。单转染靶标Gluc-LIN28-3’-UTR报告质粒的细胞中Gaussia 荧光素酶与碱性磷酸酶活性比值设为1 (左数第一条柱),用来标准化其他细胞样品中的报告基因活性。结 果表明miR-125a抑制Gluc-LIN28-3’-UTR 的活性达70%之多(左数第二条柱)。这种抑制效应可被导入的miR-125a抑制剂表达质粒以剂量依赖的方式特异性的阻遏。转染100 ng 抑制剂表达质粒时,细胞内报告基因/参照基因活性比值已超出单独转染Gluc-LIN28-3’-UTR报告质粒的对照组(右数第一条)。这说明高效的miR-125a抑制剂阻遏掉外源共转染 的miR-125a的同时也阻遏了细胞中内源性的miR-125a对靶标报告基因的抑制,提高了GLuc-LIN28-3’-UTR转录本的稳定性和翻译水平。

Data showing inhibitory effect of vector-based miRNA inhibitors

化学合成的miRNA抑制剂

化学合成的miRNA抑制剂是序列特定的、单链寡核苷酸分子,适合瞬时转染。优化设计合成的miRNA抑制剂能够特异、高效地结合成熟的靶miRNA,阻止miRNA对靶基因的下调。

化学合成的miRNA抑制剂的特点

  • 现货供应所有人、小鼠、大鼠miRNAs的抑制剂
  • 化学修饰以提高抑制效力和持久性
  • 便于化学转染和电转转染

图3. 化学合成的miRNA抑制剂以剂量-依赖的方式抑制靶miRNA
HEK293细胞中共转染不同剂量的化学合成的miR-125a抑制剂 (GeneCopoeia HmiR-AN0094-SN) 、miR-125a 前体表达质粒(GeneCopoeia HmiR0309-MR03) 和miR-125a的靶标LIN28 3’-UTR报告质粒(GeneCopoeia HmiT019205-MT01:LIN28 的3’-UTR克隆到萤火虫荧光素酶-海肾荧光素酶双报告载体)。转染24小时后检测报告基因萤火虫荧光素酶和参照基因 海肾荧光素酶活性。单转染靶标Fluc-LIN28-3’-UTR报告质粒的细胞中萤火虫荧光素酶与海肾荧光素酶活性比值设为1 (左数第一条柱),用来标准化其他细胞样品中的报告基因 活性。结果表明miR-125a抑制Fluc-LIN28-3’-UTR 的活性达60%以上(左数第二条柱)。这种抑制效应可被导入的化学合成的miR-125a抑制剂以剂量依赖的方式特异性的阻遏( 左数第4,5,6条柱)。

Data showing inhibitory effect 

of miRNA oligonucleotides inhibitors

基于载体表达的或化学合成的miRNA抑制剂的应用

  • 用于miRNA功能缺失研究,揭示miRNA的功能
  • 用于miRNA的靶标鉴定和确认
  • 用于阐明miRNA在细胞生物学过程、生理病理途径中所起的所用,包括细胞分化、多能干细胞的形成、肿瘤发生及免疫应答等。
  • 用于诊断类生物标识物和药物靶标的鉴定及确认。

和以下产品一起完善您的miRNA功能研究

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