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miTarget™ microRNA 3' UTR 靶标克隆

search mirna UTR clone

美国GeneCopoeia(复能基因)可提供含有荧光素酶报告基因的哺乳动物载体的人、小鼠、大鼠miRNA 3' UTR靶标克隆。您可选择双荧光素酶或单荧光素酶载体在细胞裂解或不破坏靶标细胞的状态下进行实验。

miRNA 3' UTR靶标克隆可用于对预测目标的miRNA靶标鉴定和功能确证,或关于miRNA对靶标基因调节作用的研究。

3' UTR序列来源于基因序列的公共数据库并插入到各自载体系统的firefly或Gaussia荧光素酶报告基因下游。克隆采用SV40启动子,在哺乳动物细胞中转录生成包含有firefly或 Gaussia荧光素酶和3' UTR靶标序列的嵌合mRNA。因此,可通过对firefly 或 Gaussia荧光素酶的功能分析来研究mRNA-miRNA靶标的相互作用。

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图1
. miRNA 3' UTR靶标克隆载体骨架。

优势

    覆盖面广
  • 覆盖人类(23000)、小鼠(19000)和大鼠(8000)基因
    简单的系统设计
  • 3' UTR靶标序列插入在firefly或Gaussia荧光素酶下游,当miRNA复合体与3' UTR靶标特异结合时,荧光素酶的表达受到抑制。
    方便的双报告载体
  • 载体中的两个报告基因,一个可用于检测调节作用,另一个可用作内参和信号校对。
  • 排除了同时转染两个不同报告基因质粒的需要。
    可使用配套的试剂盒进行简单定量
  • 可使用配套的试剂盒对细胞裂解物(firefly荧光素酶,非分泌型)或细胞上清(Gaussia荧光素酶,分泌型)中的荧光素酶活性进行简单定量。
    活细胞分析(pEZX-MT05 vector)
  • 分泌型Gaussia荧光素酶,无需细胞裂解。
  • 节省时间和样本,减少突变,简化试验流程。

 

3' UTR靶标载体和配套分析试剂盒

载体 报告基因 跟踪基因 优势 配套试剂盒
pEZX-MT01 Firefly luciferase Renilla luciferase 需要细胞裂解 Luc-Pair™ miR Luciferase Assay Kit
pEZX-MT05 Gaussia luciferase Secreted alkaline phosphatase (SEAP) 活细胞分析 Secrete Pair ™ Dual Luminiscence Assay Kit
图2. 使用Luc-Pair™ miR Luciferase Assay kit观察靶标序列(3' UTR)表达克隆中miRNA的抑制作用。将HEK 293细胞接种在6孔板中。第二天,细胞同时转染1.0μg Lin28 3' UTR miRNA靶标序列表达克隆(pEZX-MT01载体,fLuc,产品货号: HmiT019205)、1.4μg miR-125a前体miRNA表达克隆(pEZX-MR03载体,eGFP,产品货号: HmiR0309)和miRNA对照克隆。转染18h后将细胞转移到96孔板中并继续培养24h。使用Victor II检测firefly荧光素酶和Renilla荧光素酶活性并记录数据。使用相同孔中Renilla荧光素酶活性对firefly荧光素酶活性进行校对。

 

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