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GLuc-ON™ 启动子报告克隆


GLuc-ON™ 启动子克隆采用分泌型的Gaussia荧光素酶(GLuc)作为报告子,可在活细胞中对超过20,000种人类和18,000种小鼠启动子进行实时活性分析。

可直接用于细胞转染的GLuc-ON™ 启动子克隆在GLuc报告基因上游插入一段1.2-1.5 kb的序列。这段插入序列与位于特异人类基因转录起始区上游大约1.5kb到下游200bp之间的5'序列一致。由于这段模拟的顺式作用元件存在于克隆的启动子区域内,我们可以通过观察荧光素酶的活性来研究人类细胞中启动子对基因的调节作用。

美国GeneCopoeia可提供已构建好的GLuc-ON启动子克隆,同时可提供客户定制构建服务。我们既可以提供单报告基因载体系统,也可提供双报告基因载体系统。单报告基因载体系统以Gluc或GFP作为启动子报告基因;双报告基因载体系统以Gluc作为启动子报告基因,以分泌型碱性磷酸酶(SEAP)作为信号标准化的内参。

Promoter reporter clones mechanism of action

图1. GLuc-ON™ 启动子克隆工作流程

优势

    活细胞分析
  • 分泌型Gluc报告子。
  • 无需裂解细胞。
  • 节省样本,减少突变,简化试验流程如脉冲追踪分析等。
    实时研究
  • 可获得即时检测数据。
  • 与实时活性分析过程类似。
    分泌型双报告系统
  • 分泌型Gluc和分泌型碱性磷酸酶。
  • 对多样本常规转染进行精确比较。
    高通量兼容
  • 可用于信号通路等研究。
  • 可进行高通量研究。
    高灵敏度
  • 采用GLuc作为报告基因,与萤火虫或Renilla荧光素酶相比灵敏度高1000倍。
    高品质,使用方便
  • 所有启动子克隆均可直接用于细胞转染。

Gaussia 荧光素酶

GLuc-ON™启动子克隆采用经过修饰的GLuc(mGLuc)作为报告基因,能产生强烈且稳定的荧光信号,克服了人类野生型GLuc(wtGLuc)信号衰退快等缺点。

Signal stability of mGluc and wtGlucSignal stability of mGluc and wtGluc

图2. mGLuc (蓝色) 和 wtGLuc (红色)的信号稳定性。左侧:含有稳定剂的分析缓冲液;右侧:常规分析缓冲液。

双报告系统

双报告系统也适用于GLuc-ON™ 启动子克隆。分泌型碱性磷酸酶(SEAP)作为第二个报告子可作为内参,也能对多样本常规转染进行精确比较。

图3. 启动子在H1B1B 和 HEK293T细胞中的活性分析。双报告基因启动子克隆或对照一式两份转染进两种细胞中。转染24小时((HEK293T)和48小时(H1B1B)后分析样品。NEG(包含非启动子序列)和EMPTY(载体不含启动子)作为阴性对照。

载体类型

载体 报告基因 跟踪基因 筛选标签 载体类型
pEZX-PG02 Gaussia luciferase (GLuc) N/A* Puromycin 非病毒
pEZX-PG04 Gaussia luciferase (GLuc) 分泌型碱性磷酸酶 (SEAP) Puromycin 非病毒
pEZX-PF02 eGFP N/A* Puromycin 非病毒
pEZX-PM02 mCherry N/A* Puromycin 非病毒
pEZX-LvPG02 Gaussia luciferase (GLuc) N/A* Puromycin 慢病毒
pEZX-LvPG04 Gaussia luciferase (GLuc) 分泌型碱性磷酸酶 (SEAP) Puromycin 慢病毒
pEZX-LvPF02 eGFP N/A* Puromycin 慢病毒
pEZX-LvPM02 mCherry N/A* Puromycin 慢病毒

对照克隆

产品名称 货号 载体 描述
GAPDH阳性对照克隆 GAPDH-PF02 pEZX-PF02 含管家基因启动子和单GFP报告基因的阳性对照克隆
GAPDH阳性对照克隆 GAPDH-LvPF02 pEZX-LvPF02 含管家基因启动子和单GFP报告基因的阳性对照克隆(慢病毒骨架)
GAPDH阳性对照克隆 GAPDH-PG02 pEZX-PG02 含管家基因启动子和单报告基因的阳性对照克隆
GAPDH阳性对照克隆 GAPDH-LvPG02 pEZX-LvPG02 含管家基因启动子和单报告基因的阳性对照克隆(慢病毒骨架)
GAPDH阳性对照克隆 GAPDH-PG04 pEZX-PG04 含管家基因启动子和双报告基因的阳性对照克隆
GAPDH阳性对照克隆 GAPDH-LvPG04 pEZX-LvPG04 含管家基因启动子和双报告基因的阳性对照克隆(慢病毒骨架)
GAPDH阳性对照克隆 GAPDH-PM02 pEZX-PM02 含管家基因启动子和单mCherry报告基因的阳性对照克隆
GAPDH阳性对照克隆 GAPDH-LvPM02 pEZX-LvPM02 含管家基因启动子和单mCherry报告基因的阳性对照克隆(慢病毒骨架)
阴性对照克隆 NEG-PF02 pEZX-PF02 无启动子序列、含单GFP报告基因的阴性对照克隆
阴性对照克隆 NEG-LvPF02 pEZX-LvPF02 无启动子序列、含单GFP报告基因的阴性对照克隆(慢病毒骨架)
阴性对照克隆 NEG-PG02 pEZX-PG02 无启动子序列、含单报告基因的阴性对照克隆
阴性对照克隆 NEG-LvPG02 pEZX-LvPG02 无启动子序列、含单报告基因的阴性对照克隆(慢病毒骨架)
阴性对照克隆 NEG-PG04 pEZX-PG04 无启动子序列、含双报告基因的阴性对照克隆
阴性对照克隆 NEG-LvPG04 pEZX-LvPG04 无启动子序列、含双报告基因的阴性对照克隆(慢病毒骨架)
阴性对照克隆 NEG-PM02 pEZX-PM02 无启动子序列、含单mCherry报告基因的阴性对照克隆
阴性对照克隆 NEG-LvPM02 pEZX-LvPM02 无启动子序列、含单mCherry报告基因的阴性对照克隆(慢病毒骨架)
分泌型碱性磷酸酶(SEAP)表达克隆  SEAP-PA01 pEZX-PA01 表达SEAP,可用于和启动子克隆共转染。
分泌型碱性磷酸酶(SEAP)表达克隆  SEAP-LvPA02 pEZX-LvPA02 于慢病毒骨架中表达SEAP,可用于和启动子克隆共转染。
EF1α阳性对照克隆 EF1A-PG02 pEZX-PG02 含管家基因启动子和单报告基因的阳性对照克隆。
EF1α阳性对照克隆 EF1A-PG04 pEZX-PG04 含管家基因启动子和双报告基因的阳性对照克隆
EF1α阳性对照克隆 EF1A-PF02 pEZX-PF02 含管家基因启动子和单GFP报告基因的阳性对照克隆
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