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表1:人源let系列miRNA及其miR-98序列

miRNA ID miRNA SEQ
hsa-let-7a UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU
hsa-let-7b UGAGGUAGUAGGUUGUGUGGUU
hsa-let-7c UGAGGUAGUAGGUUGUAUGGUU
hsa-let-7d AGAGGUAGUAGGUUGCAUAGUU
hsa-let-7e UGAGGUAGGAGGUUGUAUAGUU
hsa-let-7f UGAGGUAGUAGAUUGUAUAGUU
hsa-let-7g UGAGGUAGUAGUUUGUACAGUU
hsa-let-7i UGAGGUAGUAGUUUGUGCUGUU
hsa-miR-98 UGAGGUAGUAAGUUGUAUUGUU

以let-7a为参考,其它let系列miRNA与其比对后的碱基差异(以红色标记)

表2:通过各miRNA特异引物分别检测人源let系列miRNA来进行检测分辨率测试

  miRNA qPCR Detection System的相对检测分辨率
miRNA

质粒模板
All-in-One™ miRNA qPCR Primer
let-7a let-7b let-7c let-7d let-7e let-7f let-7g let-7i miR-98
hsa-let-7a 100.00% 0.01% 0.33% 0.08% 3.21% 0.41% 0.00% 0.00% 0.00%
hsa-let-7b 0.00% 100.00% 0.42% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00%
hsa-let-7c 0.32% 2.05% 100.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00%
hsa-let-7d 8.97% 0.00% 0.00% 100.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00%
hsa-let-7e 1.51% 0.00% 0.01% 0.00% 100.00% 0.01% 0.00% 0.00% 0.00%
hsa-let-7f 2.67% 0.00% 0.01% 0.00% 0.04% 100.00% 0.00% 0.00% 0.00%
hsa-let-7g 0.17% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.04% 100.00% 0.00% 0.00%
hsa-let-7i 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.01% 100.00% 0.00%
hsa-miR-98 0.01% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 0.00% 100.00%

克隆let系列的miRNA,各miRNA特异引物通过All-in-One™ miRNA qPCR detection Kit分别检测以105分子数的此miRNA质粒。以引物与miRNA完全匹配所得的Ct值为对照,各碱基有差异的miRNA 的Ct值与之相比,通过公式(相对分辨率=2-ΔCt ×100%)即可得到miRNA qPCR Detection System 的检测分辨率。表中标记为红色的为引物和miRNA序列完全匹配的检测分辨率。灰色的为单碱基差异的检测分辨率,黄色的为双碱基差异的分辨率,白色的为2个以上碱基差异的检测分辨率

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