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ROSA26 位点（又称为 ROSAβgeo26 位点）位于小鼠基因组第6号染色体，最早是在一支名为 ROSAβgeo26 的小鼠品系中被发现的。该品系的小鼠因为一个随机插入的基因，在所有组织中都能检测到高水平的β半乳糖苷酶表达。该位点表达一个编码转录本和两个非编码的转录本，只有非编码转录本的序列受到这个外源插入的干扰。虽然两个等位区都带有外源插入片段的纯合子小鼠幼崽出生率略低于杂合子幼崽，但纯合子幼崽也能正常发育并繁殖。自此，“ROSA26”位点就被用于基因转入；这个位点的基因敲入对细胞及小鼠的健康无副作用，并能保证转入基因的正常稳定表达。
特异靶向 ROSA26 位点的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 体系能在小鼠第6号染色体上的 ROSA26 位点上生成 DNA 双链断裂，触发细胞的 DNA 修复机制，诱导基因组与 ROSA26 供体克隆之间发生同源重组（HR），将供体克隆上的 DNA 片段整合到基因组上的 ROSA26 safe harbor 位点。
| 货号 | 产品 | 描述 | 目录价 |
| 多种 | 小鼠 ROSA26 ORF 敲入克隆 | 由 CMV 启动子启动 ORF 表达。能将 ORF 或您的目的基因敲入小鼠 ROSA26 safe harbor 位点。 |  |
Genome-TALER™ 小鼠 ROSA26 safe harbor 基因敲入试剂盒能通过 TALEN 介导的同源重组将您的目的基因、筛选标记及其他遗传因子敲入小鼠基因组上的 ROSA26 位点。试剂盒包含1对 ROSA26 TALEN 质粒，1个 ROSA26 供体克隆载体或供体克隆*，1个阳性对照供体克隆及两对基因敲入PCR 验证引物组合。
| (A) | ||
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| (B) | ||
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图1. Genome-TALER™ 小鼠 ROSA26 safe harbor 基因敲入试剂盒。该试剂盒包含(A) 和 (B) 。(A) ROSA26 TALEN 及供体DNA质粒；(B) ROSA26 基因敲入 验证PCR引物组合。
| 组成 | 描述 | 数量 |
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ROSA26 TALEN 组合 – ROSA26 左侧 TALEN 及 ROSA26 右侧 TALEN |
特异剪切 ROSA26 靶标位点，产生双链断裂 |
1 对 |
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ROSA26 供体克隆载体 |
用于克隆或已装载目标基因–两侧带有 ROSA26 同源重组位点 -含CMV启动子 -GFP报告基因/嘌呤霉素筛选标记 |
1 |
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ROSA26 阳性对照供体克隆 |
装载RFP而非目标基因。用作阳性对照。 |
1 |
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基因敲入验证引物组合 |
对同源重组连接位点进行扩增的PCR引物组合，用于验证成功整合的克隆。 |
2 对 |
* 客户可另外定制 ROSA26 供体克隆。该供体克隆可取代原来的空白 ROSA26 供体载体随试剂盒发货。
| (A) | (B) |
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| (C) | ||
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图2. 小鼠基因组 ROSA26 safe harbor 基因敲入 (A) 于6孔板中用 ROSA26 阳性对照供体质粒DC-RFP-SH02 (800 ng) 与 ROSA26 TALEN 质粒对（各600 ng） 共转染或只用 ROSA26 阳性对照供体克隆转染小鼠Neuro2a 感受态细胞. (B) 转染48小时后，将细胞以1：10比例分。配到新的6孔板，用1.0 µg/ml 浓度的嘌呤霉素进行筛选该图于筛选进行两周后拍摄。 只转染 DC-RFP-SH02 的对照组板孔内只余极少量细胞。 (C) (D) 设计引物组合对同源重组连接位点进行扩增，验证成功整合的克隆。 |
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Genome-CRISP™ 小鼠 ROSA26 safe harbor 基因敲入试剂盒能通过 CRISPR-Cas9 介导的同源重组将您的目的基因、筛选标记及其他遗传因子敲入小鼠基因组上的 ROSA26 位点。试剂盒包含1个 ROSA26 sgRNA/Cas9 表达克隆，1个 ROSA26 供体克隆载体或供体克隆*，1个阳性对照供体克隆及两对基因敲入PCR 验证引物组合。
| (A) | ||
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| (B) | ||
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图3. Genome-CRISP™ 小鼠 ROSA26 safe harbor 基因敲入试剂盒。该试剂盒包含(A) 和 (B) 。(A) ROSA26 sgRNA/Cas9 表达克隆及供体DNA质粒；(B) ROSA26 基因敲入验证PCR引物组合。
| 组成 | 描述 | 数量 |
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ROSA26 sgRNA/Cas9 表达克 |
表达 sgRNA 及 Cas9 核酸内切酶特异剪切 ROSA26 位点，生成双链断裂 |
1 |
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ROSA26 供体克隆载体 |
用于克隆或已装载目标基因–两侧带有 ROSA26 同源重组位点 -含CMV启动子 -GFP报告基因/嘌呤霉素筛选标记 |
1 |
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ROSA26 阳性对照供体克隆 |
装载RFP而非目标基因。用作阳性对照。 |
1 |
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基因敲入验证引物组合 |
对同源重组连接位点进行扩增的PCR引物组合，用于验证成功整合的克隆。 |
2 对 |
* 客户可另外定制 ROSA26 供体克隆。该供体克隆可取代原来的空白 ROSA26 供体载体随试剂盒发货。
| (A) | (B) |
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| (C) | ||
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图4. 小鼠基因组 ROSA26 safe harbor 基因敲入 (A) 于6孔板中用 ROSA26 阳性对照供体质粒DC-RFP-SH02 (800 ng) 与 ROSA26 sgRNA/Cas9 表达克隆（800 ng） 共转染或只用 ROSA26 阳性对照供体克隆转染小鼠Neuro2a 态细胞. (B) 转染48小时后，将细胞以1：10比例分。配到新的6孔板，用1.0 µg/ml 浓度的嘌呤霉素进行筛选该图于筛选进行两周后拍摄。 只转染 DC-RFP-SH02 的对照组板孔内只余极少量细胞。 (C) (D) 设计引物组合对同源重组连接位点进行扩增，验证成功整合的克隆。 |
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小鼠ROSA26 Safe Harbor ORF 敲入克隆是装载客户感兴趣的基因 ORF 的 ROSA26 供体克隆。该供体克隆可搭配 Genome-TALER™ 或 Genome-CRISP™ 小鼠 ROSA26 Safe Harbor 基因敲入试剂盒使用，将客户感兴趣的 ORF 特异敲入位于小鼠第6号染色体上的 ROSA26 位点。试剂盒中的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 体系靶向剪切 ROSA26 位点， 产生 DNA 双链断裂（DSB），使该位点发生同源重组（HR）。目前这一系列敲入克隆有超过20,000条序列确证的小鼠 OFR 可供选择。
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图5. 小鼠ROSA26 Safe Harbor ORF 敲入克隆质粒图谱
ROSA26 供体克隆客户定制服务
GeneCopoeia 也提供 ROSA26 供体克隆客户定制服务，为客户构建含有突变基因或其他遗传因子的敲入克隆，用于针对 ROSA26 位点的基因敲入实验。请点击这里询价。
如有进一步疑问，请致信 sales@igenebio.com 或致电 4006-020-200 咨询。
mROSA26 donor clone custom services
GeneCopoeia 也提供小鼠 ROSA26 供体克隆客户定制服务，为客户构建含有小鼠 ORF，突变基因或其他遗传因子的敲入克隆，用于靶向 ROSA26 位点的基因敲入实验。请点击这里询价。
如有进一步疑问，请致信 inquiry@igenebio.com 或致电 1-866-360-9531 咨询。
| 服务 | 描述 | 应用 | |||
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稳转细胞株服务 |
单克隆细胞株 |
定制带有 TALEN 或 CRISPR-Cas9 介导的safe harbor 位点基因敲入的单克隆稳转细胞株。 | TALEN, CRISPR-Cas9 | 人类 AAVS1, 小鼠 ROSA26 | |
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细胞库 |
为带有 TALEN 或 CRISPR-Cas9 介导的safe harbor 位点基因敲入的单克隆稳转细胞株建库 | TALEN, CRISPR-Cas9 | 人类 AAVS1, 小鼠 ROSA26 | ||
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转基因小鼠服务 |
转基因小鼠 |
定制带有 TALEN 或 CRISPR-Cas9 介导的 ROSA26 位点基因敲入的转基因小鼠。 |
TALEN, CRISPR-Cas9 | 小鼠 ROSA26 | |
应用说明
GeneCopoeia genome editing tools for safe harbor integration in mice and humans
FAQs
Webinar
Watch recorded webinar: Solutions for genome editing: TALEN & CRISPR-Cas9, and Safe Harbor Knock-in ORF clones
Download webinar PPT slides
用户手册
小鼠 ROSA26 safe harbor 用户手册（1.0版）
小鼠 ROSA26 CRISPR safe harbor 用户手册（2.0版）
小鼠 ROSA26 TALEN safe harbor 用户手册（2.0版）
人类 AAVS1 safe harbor 基因敲入试剂盒及克隆
Genome-TALER™ 及 Genome-CRISP™ 人类 AAVS1 safe harbor 基因敲入试剂盒 – 试剂盒能通过 TALEN 或 CRISPR-Cas9 介导，将您的目的基因、筛选标记及其他遗传因子特异敲入人类第19号染色体上的 AAVS1 safe harbor 位点。我们有超过20,000条经过序列确证的人类ORF可用于构建 AAVS1 ORF 供体克隆。AAVS1 位点的安全整合能保证敲入基因被正常转录，并对细胞无已知的副作用。
TALE 及 CRISPR-Cas9 基因组编辑工具
Genome-TALER™ TALEN 及 TALE-TF 客户定制服务 – GeneCopoeia提供TALENs,TALE-TFs和其他基于TALE的靶向基因组修饰因子的设计，构建和验证服务。服务层次选择丰富，价格合理。
Genome-CRISP™ CRISPR-Cas9 产品及服务 – GeneCopoeia提供CRISPR-Cas9 sgRNA 设计及克隆服务，Cas9表达克隆和其他相关产品及服务，为客户实现简便快捷的靶向基因组编辑。
