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OmicsLink™ shRNA表达克隆

OmicsLink™ shRNA表达克隆是将针对靶基因设计shRNA(小发夹结构RNAi)靶点序列,然后将其装于表达载体中,我公司现可提供4套表达载体,可用于对人、小鼠、大鼠以及其他物种的全基因组范围的基因表达抑制研究。我公司还提供相应的全长人类和小鼠基因的ORF表达克隆,可用于相应基因的功能获得研究,还可用于shRNA克隆的确证。


图1. 使用H1 或 U6 启动子的表达载体构建的shRNA克隆。 Top

OmicsLink™ shRNA表达克隆原理


图2. shRNA导致基因表达抑制的机制


我公司提供基于shRNA技术的siRNA产品,可用于瞬时和稳定的基因表达抑制。表达质粒DNA或包含shRNA的病毒颗粒被导入靶细胞。使用哺乳动物启动子驱动目的序列的转录,序列经设计包括茎(19-29对核苷酸)和环,随后由RNAi机制中的酶加工成为成熟的siRNA,siRNA和RISC复合体对目的基因所转录的mRNA产生特异的切割降解作用,从而导致了基因表达抑制。 (见图2)

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OmicsLink™ shRNA表达克隆的特性    

名称 siRNA制备方法 基因沉默时效 荧光标记 基因传递方式 科研定位特点
哺乳动物细胞载体shRNA克隆
  • 根据ORF编码区设计55-56mer长的shRNA。
  • 定制并合成oligoDNA引物(为效应序列)。
  • 将效应序列克隆到普通瞬转载体中,并获得转化子。
  • 含有重组质粒细菌扩增并提取质粒。
2周左右 不能 脂质体/电转
  • 可大量复制;重复使用
  • 实验简单方便
  • 慢病毒载体shRNA克隆
    • 根据ORF编码区设计55-56mer长的是shRNA。
    • 定制并合成oligoDNA引物(为效应序列)。
    • 将效应序列克隆到普通瞬转载体中,并获得转化子。
    • 含有重组质粒细菌扩增并提取质粒。
    2周或更长的时间;已构建成细胞株 不能
    • 脂质体/电转
    • 包装成病毒颗粒;可感染原代细胞,非分裂细胞,干细胞或神经细胞
    • 可大量复制;重复使用
    • 包装成病毒颗粒后,不仅细胞水平的实验可以应用,而且还可以应用到动物的活体实验
    化学合成siRNA
    • 根据ORF编码区设计长20-25bp的siRNA。
    • 选择可信赖厂家,定制合成siRNA。
    3-7天 可以 脂质体/电转
    • 即购即用,是消耗品。方便筛选有效的干扰序列信息。
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    OmicsLink™ shRNA表达克隆的应用    

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    OmicsLink™ shRNA表达克隆的基因表达抑制效应的检测方法

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    产品保证

    shRNA表达克隆的表达框已经全长测序,包括启动子、正义和反义靶序列、发夹结构、终止信号及其他接头序列。 对于构建到psi-sH1载体中的人类激酶组shRNA克隆,我们每个基因提供1~3个克隆,所有克隆均已通过AP色度法确证其对靶基因的表达抑制水平达到70%以上。对于构建到慢病毒和哺乳动物载体的shRNA克隆,我们每个基因提供4个克隆。我们保证至少有1个克隆达到在mRNA水平对靶基因的表达抑制水平达到70%以上,前提是用前面所提的检测方法,并严格按照说明书所提供的操作流程和注意事项进行实验。如果经过我公司核实,的确4个中没有1个有所期望的表达抑制水平的话,我公司承诺免费更换1-4个shRNA克隆。

    * 本产品仅供研究、不用于临床诊断

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