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AviTag™ 技术— 用于蛋白纯化、固定、检测的生物素化标记

产品介绍

AviTag™是常用的融合标签因为其多样的应用,满足科研的多种需求。 

  • 表达
  • 显影
  • 检测
  • 定位
  • 纯化
  • 固定

 

技术介绍

AviTag™标签蛋白可以被体内或体外的生物素连接酶生物素酰化,抗生物素蛋白或链霉亲和素可以专一地与生物素结合,因而可用于蛋白的固定,纯化和显影。点击看 AviTag技术的应用

可与OmicsLink™即用型表达克隆配套使用

GeneCopoeia提供带有 AviTag™ 标签的多种载体,部分载体上带有 IRES (Internal Ribosome Entry Site)或SUMO, 6xHIS等元件。点击查看带有AviTag所有表达克隆载体。

带有AviTag的载体由T7或CMV启动子驱动转录,可以应用于 20,000多种人和15,000种小鼠基因。

 

特异性

带有AviTag的重组蛋白的生物素酰化具有高度特异性。当反应体系中存在生物素和ATP时,生物素连接酶可催化形成酰胺键,链接生物素与15-aa 肽链的特定赖氨酸基团。

生物素酰化的蛋白在天然条件下极难发生交叉反应,尤其比抗体发生交叉反应的概率要低得多。

GeneCopoeia也提供生物素连接酶,生物素化的菌株和带有 Avitag的载体

点击了解生物素连接酶

 

与化学生物素标记相比的优势

  • 化学生物素标记可能会因为随机的生物素化将生物素连接到蛋白催化或者结合的区域,导致蛋白失活。 使用Avi-Tag可以在体内体外简单有效地生物素化特异的AviTag位点。
  • 使用Avi-Tag进行生物素酰化可以在温和的条件下进行高效特异地标记。
  • 化学生物素标签是85个氨基酸,而生物素AviTag标签只有15个氨基酸,可以尽量降低标签对蛋白的空间结构的影响。
AviTag ORF cDNA clones

 

 

 

AviTag ORF cDNA clones

Figure1. OmicsLink ORF cDNA expression clones with N- and C-terminus AviTag in various mammalian vector systems.

 

How it works

AviTag ORF clone to biotinylated protein

载体信息

带有Avitag表达载体列表

载体 启动子 宿主细胞 筛选标记 标签 蛋白酶位点
pReceiver-B09 T7 E. Coli N/A N-Avi N/A
pReceiver-Lv108 CMV Stem/primary/others* Puromycin N-Avi N/A
pReceiver-Lv124 CMV Stem/primary/others* Puromycin C-Avi N/A
pReceiver-Lv242 CMV Stem/primary/others* Puromycin C-Avi-FLAG N/A
pReceiver-M05 CMV Mammalian Neomycin N-Avi N/A
pReceiver-M17 CMV Mammalian Neomycin C-Avi N/A
pReceiver-M48 CMV Mammalian Neomycin N-Avi+IRES-Biotin ligase N/A
pReceiver-WG04 T7 cell free N/A N-AviSUMO SUMO Protease
pReceiver-WG05 T7 cell free N/A N-HisAviSUMO SUMO Protease
pReceiver-WG31 T7 cell free N/A N-HisSUMOAvi SUMO Protease

 

点击了解即用型ORF克隆,提供大肠杆菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母和麦胚无细胞表达克隆载体。

查看 AviTag™相试剂

AviTag™是Avidity的商标,AviTag™技术(美国专利号5,723,584、5,874,239和5,932,433)由科罗拉多州丹佛的Avidity有限公司所有。

 

 

 

应用实例

   带AviTag的cDNA克隆及融合蛋白的应用

  • 固定化的AviTag标签融合蛋白的应用于高通量筛选、表面等离子体共振检测蛋白间相互作用等方面。
  • 利用单体抗生物素来进行AviTag融合蛋白纯化。
  • 与抗生物素或链霉亲和素结合之后,AviTag标签融合蛋白可以使用多种方法检测,如Western Blots和MHC四聚体(染色和分选T细胞)

 

严格的质检和质量保证

OmicsLink clone collection里的所有ORF表达克隆源于验证过的全长cDNA克隆或高质量的人源cDNA组织文库。

寄送之前,GeneCopoeia对所有的克隆进行了严格的质检过程。

  • 所有的ORF经过全长测序
  • 通过PCR验证序列长度
  • 通过酶切验证质粒的正确性

 

体外生物素酰化AviTag重组蛋白示例

Biotinylated proteins visualized on a western blot with streptavidin-HRP conjugate and chemiluminescent substrate
 

Figure2. 转染带有AviTag和eGFP的载体或AviTag- IkBα表达克隆到293T细胞,以未转染的细胞为对照,所有细胞均加入纯化的生物素连接酶、生物素(50M) 、ATP(10mM)。 的提取物的混合纯化的生物素连接酶,生物素( 50M )和ATP ( 10mM的)如该图所示。混合物在30℃孵育30分钟 ( 1-7、 9-13泳道 )或4℃孵育30分钟(8、14泳道)后SDS-PAGE结果如图所示。生物素化的蛋白通过和链霉亲和素-HRP、化学发光底物(Pierce)结合,可以使用western blot显影。

 

体内生物酰素化AviTag重组蛋白示例

Biotinylated proteins visualized on a western blot with streptavidin-HRP conjugate and chemiluminescent substrate
 

Figure3.仅转染带有AviTag和eGFP的载体或AviTag- IkBα表达克隆到293T细胞,或共转染生物素连接酶。13小时后提取产物使用 12% SDS-PAGE凝胶进行电泳。生物素化的蛋白通过和链霉亲和素-HRP、化学发光底物(Pierce)结合,可以使用western blot显影。

 

Example of precipitation of biotinylated AviTag recombinant proteins with streptavidin beads

Biotinylated proteins visualized on a western blot with streptavidin-HRP conjugate and chemiluminescent substrate
 

Figure4. 293T cells were transfected with different combinations of AviTag expression plasmids and biotin ligase, as indicated in the figure. Lysates were prepared 24 hours after transfection and incubated with streptavidin beads for 8 hours. Suspensions were centrifuged and pelleted beads were washed 3 times. Cell lysates (L), supernatants (S) and pelleted biotinylated protein bound to streptavidin beads (B) were resolved by SDS-PAGE. Biotinylated proteins were visualized on a western blot with streptavidin-HRP conjugate and chemiluminescent substrate (Pierce).