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产品信息
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CRISPR/TALEN 插入缺失检测体系
IndelCheck™ CRISPR/TALEN 插入缺失检测体系
复能基因开发的 IndelCheck™ CRISPR/TALEN 插入缺失检测体系能为您的基因组编辑研究提供强大的助力。 IndelCheck 检测体系主要可用于以下两方面应用：
CRISPR sgRNA 或 TALEN 功能验证（图 1） ：在进行需时较长的基因组编辑项目之前（基因组编辑细胞株通常需时3-6个月，基因组编辑小鼠模型通常需时6-9个月），先进行功能验证预实验能排除剪切效率不佳的 CRISPR sgRNA 或 TALEN设计，节省大量实验时间。
筛选基因敲除或敲入阳性的单克隆细胞株（图 2）。
产品优势
简化您的 CRISPR/TALEN 功能验证及基因敲除克隆筛选
靶点序列 PCR 扩增能力强大，无需分离基因组
优化过的 T7 核酸内切酶 I 检测系统，含阳性对照，易于上手
应用 1: CRISPR sgRNA/TALEN 功能验证
图 1. 使用IndelCheck™体系对 CRISPR 或 TALEN 进行功能验证。收集经 CRISPR 或 TALEN 转染的细胞，并针对靶点序列设计引物，使用靶点 PCR 试剂盒（1）扩增经过 CRISPR/TALEN 扩增的靶点序列。所得的 PCR 产物经解链退火生成杂交 DNA 双链产物，其中部分部分可能存在错配，可以被 T7 核酸内切酶 I 试剂盒（2）酶切检出。如果 CRISPR/TALEN 对基因组的编辑功能是阳性的，错配酶切所产生的条带可以通过电泳跑胶观察到。
应用 2: 筛选 CRISPR 或 TALEN 介导的基因组修饰
图 2. 使用 IndelCheck™ 体系筛选带有目的基因组修饰的单克隆细胞株。接种经 CRISPR 或 TALEN 转染的细胞并挑取单克隆细胞株，然后针对靶点序列设计引物，使用靶点 PCR 试剂盒（1）扩增经过 CRISPR/TALEN 扩增的靶点序列。左侧的流程用于筛选非同源末端连接（NHEJ）机制介导的基因敲除克隆，利用 T7 核酸内切酶 I 检测试剂盒（2）对靶点 PCR 产物进行错配酶切，检测NHEJ机制引入的插入缺失突变；检测阳性的 PCR 产物通过靶点 PCR 克隆试剂盒（3）装载体送测，对引入的突变进行测序确证。右侧的流程用于鉴别基因敲除或基因敲入修饰，使用靶点 PCR 克隆试剂盒（3）将靶点 PCR 产物装载体送测，检测和确证靶点引入的基因组修饰。
以下图片是使用 IndelCheck™ 靶点 PCR 试剂盒及 T7 核酸内切酶 I 检测试剂盒进行的一个典型的功能验证实验的结果：
图 3. T7 核酸内切酶 I 酶切基因组PCR产物。该基因组经CRISPR-Cas9编辑。 对照细胞（-）的酶切产物应只有一条带，对应没有被切开的基因组PCR产物。转染了有活性的CRISPR-Cas9克隆的实验组（+），酶切产物跑胶出现3条带：1条来自未被编辑的细胞的基因组PCR产物，其余两条较短的条带为长度符合预期的错配酶切产物。
图 4. Smart-Join™ Blunt-end PCR Cloning Kit的性能比较。 将多组不同长度的PCR产物进行连接反应并转化涂板，然后检测菌落总数和阳性率。 显示SmartJoin™ Target Site PCR Cloning Kit（GeneCopoeia, Cat.No.IC007）的连接效率与Zero Blunt™ PCR Cloning Kit（Thermo Fisher, Cat.No.K275020）相当。
图 5. 多组Control Insert连接产物凝胶电泳图