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Safe Harbor 基因敲入试剂盒及敲入克隆
Safe Harbor 基因敲入试剂盒及敲入克隆
通过在染色体上的特定位点插入目的基因和其他遗传因子，对基因组进行改造——这项实验在细胞工程上具有极大的价值。经过基因改造的细胞在医学研究、基因功能研究及族系跟踪和分析中扮演着重要的角色。而所有这些应用都取决于转入基因功能的可靠性和可预测性，同时需要转入基因不扰乱内源基因和/或其他调控因子的功能。相反，随机整合的转入基因会带来不可预知的插入或突变，构成威胁。
今年发展的新实验方法是将基因转入基因组上一个已知的安全位点。人类第19号染色体上的 AAVS1（又名为 PPP1R2C 位点）或者小鼠基因组上的 ROSA26 就是这种经过验证的“安全港”位点。它们具有开放的染色质结构，能保证转入基因片段的功能。最重要的是，在这些位点插入外源基因片段对细胞无已知的副作用。
特异靶向 safe harbor 位点的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 能在基因组的 safe harbor 位点上生成 DNA 双链断裂（DSB），诱发 DNA 的自然修复机制，促使该位点与对应的 ORF 敲入克隆之间发生同源重组（HR）（图1），将 ORF 敲入克隆上的 DNA 片段整合到基因组的 safe harbor 位点。
图1. 基因组编辑工具介导的 safe harbor 基因敲入原理图
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